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阴离子色谱柱洗脱和保留特性的变化规律
点击次数:451 发布时间:2018-08-06 打印本页面 返回
阴离子色谱柱是一款氢氧根阴离子交换色谱柱,能快速梯度分离各种样品中常见无机阴离子,该柱子关键的应用是检测高纯水中常见无机阴离子。该色谱柱具有较低的硫酸根空白,基线能快速平衡来分析痕量的阴离子。
 
阴离子色谱柱洗脱:
1、洗脱液的选择:
(1)保证所有组分在洗脱液梯度范围内都是稳定的。
(2)要使结合在离子交换剂上的所有组分在洗脱液梯度范围内都能够被洗脱。
(3)梯度范围尽量小一些,以提高分辨率。
 
2、洗脱方式:离子交换色谱一般采用梯度洗脱,通常有改变离子强度和改变pH值两种洗脱方式。
(1)改变离子强度的洗脱:在洗脱过程中逐步增大离子强度,从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来。
(2)改变pH值的洗脱:阳离子交换剂一般是pH值从低到高洗脱,阴离子交换剂一般是pH值从高到低洗脱。由于pH值可能对蛋白的稳定性有较大的影响,一般采用改变离子强度进行洗脱。
 
3、洗脱速度:洗脱液的流速会影响离子交换分离效果,洗脱速度通常要保持恒定。一般来说,洗脱速度慢比快的分辨率要好,但过慢会造成分离时间长、样品扩散、谱峰变宽和分辨率降低等。
如果洗脱峰相对集中于某个区域造成重叠,应适当缩小梯度范围或降低洗脱速度来提高分辨率。如果分辨率较好,但洗脱峰过宽,可适当提高洗脱速度。
 
阴离子色谱柱保留特性的变化规律及应对措施
在离子交换色谱中,存在着3种电离平衡,分别是样品组分的电离平衡、流动相中缓冲溶液的电离平衡、柱上离子交换基团的电离平衡。
阴离子色谱柱保留行为的变化、流动相组成的调整,会综合影响到上述的电离平衡,这种影响较为复杂,并不是一致的。如提高流动相的pH值,会促进流动相的电离,增加流动相的洗脱强度,减小样品组分的保留;pH值的增加同时又会促进样品的电离,增加样品组分的保留,同时还会抑制阴离子色谱柱上硅烷铵盐的电离,减小样品组分的保留。
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