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凝胶制备液相色谱仪的调整原则和进样方式
点击次数:196 发布时间:2018-07-11 打印本页面 返回
凝胶制备液相色谱仪分析方法开发中流动相的调整原则:
1、由强到弱:一般先用90%的乙腈或甲醇-水或缓冲溶液进行试验,可很快得到分离结果,然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2、三倍规则:每减少10%的有机溶剂(乙腈或甲醇)的量,保留因子增加约3倍,此为三倍规则。调整时注意观察各个峰的分离情况。
3、粗调转微调:当分离达到一定程度时,应将有机溶剂(乙腈或甲醇)10%的改变量调整为5%,并据此规则逐渐降低调整率,直至各组分的分离情况不再改变。

凝胶制备液相色谱仪的进样方式
1.隔膜进样。用微量注射器将样品注进专门设计的与色谱柱相连的进样头内,可把样品直接送到柱头填充床的中心,死体积几乎即是零,可以获得的柱效,且价格便宜,操纵方便。但不能在高压下使用;此外隔膜轻易吸附样品产生记忆效应,使进样重复性只能达到1~2%;加之能耐各种溶剂的橡皮不易找到,常规分析使用受到限制。  
2.停流进样。可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”;另一缺点是保存时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中,效果较好。  
3.阀进样。一般HPLC分析常用六通进样阀,其关键部件由圆形密封垫和固定底座组成。由于阀接头和连接管死体积的存在,柱效率低于隔膜进样,但耐高压,进样量正确,重复性好,操纵方便。  
4.自动进样。用于大量样品的常规分析。  
早期使用隔膜和停流进样器,装在凝胶制备液相色谱仪进口处。现在大都使用六通进样阀或自动进样器。进样装置要求:密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。
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